颗粒溶素和穿孔素真核共表达及其对a549细胞的影响

目的：克隆人颗粒溶素和穿孔素基因并构建真核表达载体pgnly-2a-pfp，观察其在人肺癌a549细胞中的表达情况。方法：体外分离培养外周血单个核细胞并抽提总rna,rt-pcr扩增人颗粒溶素和穿孔素的基因片段，并将其分别插入pmd18-t进行测序，鉴定正确后构建pires-gnly、pires-pfp及pgnly-2a-pfp并转染人肺癌a549细胞，rt-pcr和间接免疫荧光检测目的蛋白表达，流式细胞annexinv/pi检测转染后细胞凋亡情况。结果：成功获取了人颗粒溶素和穿孔素cdna，构建了真核表达载体pires-gnly、pires-pfp、pgnly-2a-pfp，转染a549细胞后检测出了目的蛋白的表达，pgnly-2a-pfp转染组细胞死亡率高于其他对照组（p<0.05），死亡细胞以凋亡为主。结论：人颗粒溶素和穿孔素基因可以在人肺癌a549细胞中表达，二者共表达能够促进细胞凋亡，这将有助于颗粒溶素和穿孔素在肿瘤治疗中应用的后续研究。