lox-1特异性小发夹rna表达载体的构建及其对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响

[摘　要]　目的：靶向血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1基因的发卡样sirna(shrna)表达载体及其对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响。方法：(1)采用dna重组技术,将lox-1shrna双链与线性化pgenesil-1质粒表达载体连接,脂质体法转染小鼠单核巨噬细胞（raw264.7）,半定量逆转录聚合酶链反应法检测lox-1mrna的表达，westernblot法检测lox-1蛋白的表达。(2)ox-ldl诱导巨噬细胞建立泡沫细胞模型，lox-1-shrna进行干预，干预组使用脂质体法进行细胞转染，转染24小时后，再加入ox-ldl作用24小时，用油红o染色法及细胞内游离胆固醇及总胆固醇测定法观察对泡沫细胞形成的影响，倒置荧光显微镜观察转染lox-1shrna后raw264.7细胞对dil-ox-ldl的摄取率。结果：测序鉴定发现插入的发卡样序列正确，成功合成了发卡样lox-1基因rna干扰表达载体；靶向lox-1基因的发卡样shrna表达载体转染raw264.7细胞后，其lox-1基因和蛋白表达显著下调,同时可抑制巨噬细胞源性泡沫细胞形成及对dil-ox-ldl的摄取。结论：成功构建了能有效抑制lox-1mrna表达的发卡样lox-1基因rna干扰表达载体，并在一定程度上能抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成，为进一步利用rna干扰技术防治动脉粥样硬化提供理论基础。