家蚕longsage文库鉴定及延长标签的改进glgi方法

结合标签的基因序列延伸（glgi）是随着基因表达序列标签（sage）应运而生的一种鉴定新标签的技术。为了克服该技术操作繁琐、成本高的弊端，本文根据已经构建的家蚕限性茧色品种的2个longsage文库，选择30个差异表达的标签（tag）进行glgi延伸。尝试了几个简化，（1）用totalrna代替mrna进行dsdna的合成；（2）调整磁珠吸附dna的顺序；（3）在pcr反应中用普通的dna聚合酶代替高保真酶（pfu）。结果显示，30个标签有27个获得有效扩增，扩增序列真实包括了sage标签的17bp序列，3个标签的结果符合ncbi的家蚕数据库已有注释，13个未注释标签经过延长后得到了注释，11个标签序列为待确定的新基因序列。这种简化能够作为家蚕sage文库其他tag和新基因研究的有效简化操作体系。与传统的方法相比，本操作方法减少成本30%以上，缩短操作时间20%。