邻近多位点基因突变的组合大引物pcr策略

本文报道了一种新的组合多位点突变策略，通过单管中三阶段聚合酶链式反应（pcr）得以实现。在第一阶段，pcr扩增出多位点突变大引物，然后在第二阶段延伸大引物，在第三阶段获得全长突变基因序列。基于退火温度与热循环参数的组合大引物反应的优化，三个阶段中退火温度差异小（低于10°c），成功扩增出多位点突变基因序列和比邻突变序列。该策略是一种简单和高效的多位点突变方法。