人组氨酸磷酸酶php14的原核表达及其体外互作蛋白的研究

目的：表达和纯化人组氨酸磷酸酶php14蛋白，并寻找与其存在体外相互作用的蛋白。方法：pcr扩增php14的全长cdna，并将其克隆至pgex4t原核表达载体，构建重组表达质粒。用重组表达质粒转化大肠杆菌bl21菌株，经iptg诱导后，使用glutathionesepharose4b凝胶颗粒进行亲和纯化，通过sds-page电泳确定融合蛋白的表达。进行gst-pulldown实验，寻找体外与php14相互作用的蛋白，并进行质谱鉴定。结果：在大肠杆菌bl21中成功了表达出了php14的可溶性融合蛋白；经glutathionesepharose4b凝胶颗粒纯化后，获得了纯化的gst-php14融合蛋白，gst-pulldown实验和质谱鉴定结果发现php14与hsp90在体外存在相互作用。结论：实现了php14的原核表达和纯化，发现php14与hsp90在体外可能存在相互作用。