细胞核受体lxrβ的体外酶标测活方法的建立与应用

目的：克隆并表达大鼠细胞核受体lxrβ配体结合区（lbd）序列，并进行配体依赖性受体与共激活因子结合区短肽相互作用的酶标法分析，建立简易经济可靠的体外高通量筛选lxr调节剂方法。方法：从含大鼠lxrβcdna序列的psg5/rlxrβ上扩增lbd区序列，测序核实序列后，将此序列克隆入表达载体，构建原核表达载体pet28a(+)-rlxrβ-lbd；将重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3)，iptg诱导表达重组蛋白，通过sds-page、westernblotting检测，及ni2+亲和层析柱分离纯化；建立elisa方法检测配体依赖性受体-共激活短肽相互作用。结果：重组蛋白rlxrβ-lbd在大肠杆菌中高效表达（占菌体总蛋白30%），sds-page显示在36kd处有免疫特异性蛋白，纯化后全长蛋白占90％以上。elisa结合测试显示在激动剂猪脱氧胆酸二甲酰胺存在时，rlxrβ-lbd能与共激活短肽结合，亲和力与双荧光酶报告基因测活结果吻合。结论：成功克隆并表达rlxrβ-lbd序列，建立起elisa筛选方法，为lxr-lbd配体功能活性的研究和配体的高通量筛选提供新方法。