禽流感病毒h5n1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达

目的：克隆、表达和鉴定禽流感病毒h5n1血凝素基因（hemagglutinin，ha）和神经氨酸酶基因（neuramidinase，na）序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法：在成功克隆禽流感病毒h5n1全长ha、na基因并测序的基础上，将部分基因序列克隆到表达载体pet32a（＋）上，全基因序列克隆到表达载体pgex4t-1上，构建了重组表达质粒pet32a（＋）/ha(49~1587bp)、pet32a（＋）/na(121~1141bp)、pgex4t-1/ha、pgex4t-1/na，转化大肠杆菌bl21/rosetta，iptg诱导表达，利用ni2＋亲和层析柱和gstrap4b亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，并用westernblotting和elisa方法检测其抗原性。结果：重组蛋白在大肠杆菌中可以高效达,sdspage显示其相对分子质量与预计大小一致，蛋白纯度占总蛋白的90％以上。elisa和westernblotting实验证实，重组蛋白具有良好的抗原性。结论:成功克隆和表达了禽流感病毒h5n1ha、na基因序列,为禽流感病毒h5n1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。