抑癌基因fhit重组腺病毒的构建表达及其在结肠癌细胞中的生物学功能

目的：构建携带抑癌基因fhit的重组腺病毒并通过其研究fhit蛋白对结直肠癌细胞增殖能力的影响。方法：利用pcr方法从人胎肝文库中克隆fhit基因片段，fhit基因pcr产物连入t载体构建重组质粒pmd18t-fhit。测序正确后，将基因片段导入ptrack-cmv穿梭质粒中，构建重组穿梭载体ptrack-cmv-fhit。将经pmeⅰ单酶切线性化的ptrack-cmv-fhit和骨架腺病毒质粒padeasy-1共转bj5183大肠杆菌，使ptrack-cmv-fhit和padeasy-1发生同源重组。经paci酶切鉴定正确后,将重组腺病毒质粒转染293a细胞获得表达fhit蛋白的重组腺病毒rad-fhit，将获得的重组腺病毒感染结肠癌细胞，采用蛋白印迹法检测外源fhit蛋白的表达，并进一步观察其对细胞增殖能力的影响。结果：我们成功构建了携带有fhit基因的重组腺病毒，且能够在结肠癌细胞中成功表达fhit蛋白。在结肠癌细胞中，fhit蛋白明显减弱了结肠癌细胞的增殖能力。结论：在结肠癌细胞中，fhit基因可能扮演抑癌基因的角色，而表达fhit的重组腺病毒很可能成为一种结肠癌生物治疗的新策略。