骨骼肌特异表达线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因载体的构建与验证

根据猪α-actin基因已知dna序列设计合成了两个特异性引物,以猪基因组dna为模板,通过pcr扩增得到α-actin5'调控序列,然后与线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因cdna、去除cmv启动子的表达载体pcdna3.1连接构成肌肉特异性表达载体pcdna3.1-af,小鼠股四头肌注射该重组载体,rt-pcr检测证明其表达有效性。pcr扩增出1815bp的特异性片段,dna测序结果证明该克隆片段与α-actin5'端调控区序列相比具有很高的一致性,含有肌肉特异性元件;小鼠股四头肌注射重组载体,rt-pcr显示肌肉内ω-3脂肪酸去饱和酶基因得到有效转录。