6-羟基-3-琥珀酰吡啶单加氧酶hspb的结构研究

在蛋白晶体结构难以获得的情况下,通过设计突变体来获取6-羟基-3-琥珀酰吡啶单加氧酶hspb的结构信息。首先获取hspb蛋白的同源序列并进行比对,之后对hspb蛋白进行同源建模和从头建模,并与底物2,5-二羟基吡啶(hsp)进行对接模拟;通过分子模拟、序列比对和参考同源蛋白晶体三种方式,设计并构建hspb酶的25个突变体;通过突变体的表达纯化和酶动力学常数测定来研究hspb的结构性质。根据实验结果,推测fad的正确结合在稳定hspb蛋白结构中具有重要的作用,同时推测底物hsp和辅酶nadh处于同一活性中心并与不同位点相互作用。吡啶衍生物是极具工业价值的化合物,生物催化法是合成吡啶衍生物的有效途径,而吡啶衍生物的生物催化研究较少,通过考察突变体的性质,推测了hspb的部分结构信息,为此类吡啶单加氧酶的工业改造和应用奠定了基础。