产耐高温谷氨酰胺转胺酶菌株的快速筛选方法

目的:采用亚硝基胍(ntg)诱变结合96孔板高通量筛选方法筛选产耐高温谷氨酰胺转胺酶(mtg)的茂原链霉菌(streptomycesmobaraensis)。方法:通过优化96孔板高通量测定mtg活性的方法、确定筛选温度和时间,建立了产耐高温mtg菌株的快速筛选方法;通过优化ntg诱变条件建立了筛选突变库;通过96孔板高通量初筛、摇瓶复筛获得了产耐高温mtg的突变株12-82,并通过摇瓶发酵对12-82所产mtg进行热稳定性分析。结果:采用2mg/mlntg、ph8.0、60min的诱变条件获得突变株,将突变株的发酵上清液于70℃水浴7.5min,再在37℃空气浴、反应10min的条件下测定mtg活性,从5200株突变株中筛选出5株产耐高温mtg的突变株,其中突变株12-82在50℃水浴60min以及70℃水浴1.5min的酶活残留率均比出发株高出近20%,且80℃保温2min仍有11.9%的酶活残留率。结论:利用ntg诱变结合96孔板高通量筛选的方法筛选到5株所产mtg热稳定性相对较高的突变株,其中突变株12-82在50℃、70℃和80℃的酶活残留率均有10%~20%的提高。这为高温食品加工领域所需耐高温mtg生产菌株的高效筛选提供了可行性方案。