猪繁殖与呼吸综合征病毒gp5a多克隆抗血清的制备

构建xx2012株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,prrsv)gp5a蛋白基因的真核表达载体,并制备出gp5a蛋白的多克隆抗血清。以xx2012株prrsvgp5a蛋白的基因序列为扩增模板,设计并合成一对特异性扩增引物,通过rt-pcr扩增得到该病毒株的gp5a蛋白全长基因片段,将其定向克隆到真核表达载体pcagg中,构建含有gp5a蛋白基因的重组表达载体pcaggs-gp5a,并将获得的pcaggs-gp5a载体采用基因免疫的方式免疫balb/c小鼠制备gp5a蛋白的多克隆抗体。结果显示,成功克隆出了xx2012株prrsvgp5a蛋白全长基因,片段大小为156bp;构建的pcaggs-gp5a载体经pcr、双酶切、测序鉴定均无误;通过三次基因免疫小鼠成功制备出了gp5a蛋白的多克隆抗体,间接免疫荧光试验证实制备出的多克隆抗体能特异性识别病毒感染后的细胞。由此获得了prrsvgp5a蛋白基因的真核表达载体,制备出了gp5a蛋白的特异性多克隆抗血清,为今后开展gp5a蛋白的亚细胞定位及相关功能的研究奠定了基础。