人源类溶菌酶蛋白6在毕赤酵母中的重组表达及活性分析

利用毕赤酵母(pichiapastoris)重组表达人源类溶菌酶蛋白6(humanlysozyme-likeprotein6,hlyzl6),对其酶学性质进行分析。根据毕赤酵母密码子偏爱性设计并人工合成hlyzl6基因,将其连接至含有乙醇氧化酶启动子(aox1)的ppic9k质粒构建重组表达载体ppic9k-hlyzl6;重组表达载体经线性化后电转化入毕赤酵母gs115感受态细胞,经g418筛选获得高拷贝重组菌株后进行甲醇诱导表达。经甲醇诱导72h后发酵液上清中酶活性达到最高值,发酵液上清经sds-page检测在14.8kda处有重组hlyzl6蛋白条带,分子量符合预期,通过甲壳素亲和层析可对其进行纯化;采用比浊法测定hlyzl6酶学活性,结果表明hlyzl6对溶壁微球菌(micrococcuslysodeikticus)有较好的杀灭作用,最适反应温度为40℃,最适ph为5.5,其酶活力为54700u/mg,cu2+对其活性有明显抑制,ec50为30.2799mg/l。采用基因工程方法首次在毕赤酵母gs115成功表达了重组hlyzl6,证实其在体外具有杀菌活性,初步揭示hlyzl6在男性生殖系统先天性免疫中发挥了一定作用,为进一步研究hlyzl6的功能和应用开发奠定了基础。