增强型肿瘤特异性启动子介导cdtk治疗肝癌的体内外研究

目的:探讨运用增强子上调肿瘤特异性启动子htert转录活性后,调控自杀融合基因cdtk对人肝癌细胞系bel-7402的体内外杀伤作用。方法:将cmv增强子、htert启动子及cdtk自杀融合基因克隆入核糖体基因区打靶载体phrn,构建phr-cetpcdtk-gfp治疗载体并转染bel-7402细胞,经rt-pcr、hplc、mtt检测cdtk基因的表达和对肝癌细胞的体外杀伤效果。再将bel-7402细胞接种到裸鼠皮下致瘤,以肿瘤杀伤载体phr-cetpcdtk-gfp进行瘤内转染并检测其抑瘤效果,此外将转染后的细胞接种致瘤,检测其成瘤时间及肿瘤生长曲线等,从两方面检测其体内杀伤效果。结果:成功构建了肿瘤特异性治疗载体,体外转染肝癌细胞后,经rt-pcr、hplc证明cdtk基因能在肝癌中表达,且治疗载体在体外对肝癌细胞有明显毒性。动物实验结果发现裸鼠致瘤后治疗组血清中5-fu浓度为7.694μg/ml,治疗组肿瘤体积与对照组相比减小6.5倍。而细胞转染治疗载体后致瘤,治疗组成瘤时间比对照组晚8天,且治疗组裸鼠的平均生存期较对照组延长16天。结论:phr-cetpcdtk-gfp载体能在体内外高效靶向杀伤肝癌细胞,为肝癌基因治疗提供了一种新的途径。