鸭疫里默氏杆菌reca作为一种内参蛋白的评价

由于缺少适合的内参蛋白,所以用westernblot的方法来研究鸭疫里默氏杆菌蛋白表达的调节尚未见报道。以鸭疫里默氏杆菌基因组为模板,pcr扩增含有组氨酸标签his-tag的reca基因和截段的recap基因,并分别将其克隆于原核表达载体pet32a。将重组质粒转化到表达菌rosetta中,经1mmol/l的iptg诱导进行蛋白质表达。用组氨酸标签亲和试剂镍-琼脂糖进行重组蛋白质的纯化。用纯化的重组蛋白对4周龄的昆明鼠进行免疫,制备多克隆抗体。westernblot实验表明,截段表达的recap的多克隆抗体血清比全长reca蛋白的多克隆抗体血清与鸭疫里默氏杆菌总蛋白反应更特异;在铁离子限制性环境和血红素丰富环境中培养的鸭疫里默氏杆菌的reca蛋白表达量一致。因此,鸭疫里默氏杆菌的reca蛋白可以在铁离子和血红素代谢等研究中作为westernblot的内参蛋白。