peg定点修饰重组人睫状神经营养因子及其生物活性评价

采用分子质量为40kda的马来酰亚胺聚乙二醇(mpeg-mal),对重组人睫状神经营养因子突变体cntf-c17的第17位半胱氨酸巯基进行定点修饰,通过离子交换层析获得单修饰产物mono-peg-cntf-c17,并对其结构及体内外活性进行评价。实验结果表明,在ph7.5的tris-hcl缓冲液体中,蛋白质与修饰剂的为1:3,4℃下反应12h,修饰率可达到90%以上,修饰混合物通过一步阴离子交换层析可获得纯度98%以上的单修饰产物。荧光光谱(fl)及圆二色(cd)图谱显示mono-peg-cntf-c17与原蛋白二、三级结构一致。tf-1.cn5a.1细胞增殖活性检测表明,mono-peg-cntf-c17的比活达到了6.51×105iu/mg,体内循环半衰期相对原蛋白显著提高了30.3倍。该研究可为开发cntf长效产品提供基础。