新型人血清白蛋白特异结合肽ml的筛选及鉴定

利用噬菌体展示技术筛选和鉴定新型人血清白蛋白(hsa)特异结合7肽,分析与垂体腺苷酸环化酶激活肽27(pacap27)构成的融合多肽ml-pacap27与hsa的亲和结合力,以确定筛选的7肽(ml1和ml2)在与其他药物多肽或蛋白融合状态下仍具有较高的hsa结合活力。利用噬菌体展示7肽库,经四轮筛选、筛选克隆的dna测序、酶联免疫吸附技术分析(elisa)初步鉴定筛选克隆与hsa的亲和作用,并利用等离子共振技术(spr)定量测定合成的ml-pacap27融合多肽与人血清白蛋白的亲和力常数。实验结果表明:经筛选获得2个与人血清白蛋白特异性结合的7肽序列,其氨基酸序列分别为:ml1:lksckpl和ml2:slkshal;elisa分析结果显示,含有ml1和ml2的噬菌体均可亲和结合hsa,而且ml2的亲和结合作用高于ml1;spr分析结果显示,ml1-pacap27和ml2-pacap27与hsa的解离常数(kd)分别为:8.1×10-6mol/l和3.7×10-6mol/l,ml1-pacap27与hsa的结合力高于ml1-pacap27。筛选和鉴定了两个可与hsa特异性结合的7肽序列,该7肽序列可用于特异偶联hsa的长效分子药物的重组融合表达或设计,可为延长分子药物的半衰期及新型药物研发提供新工具。