利用gap启动子在毕赤酵母中表达与纯化glp-1类似物

胰高血糖素样肽-1(glp-1)能提高ii型糖尿病患者β胰腺细胞的胰岛素分泌量并能促进β胰腺细胞增殖,是潜在的糖尿病治疗药物。设计一种glp-1类似物aggh,即glp-1(a2g)的二联体与人血清白蛋白(hsa)的n端连接,并在融合蛋白ggh前添加一个丙氨酸(a)。pcr获得融合基因aggh,将融合基因连接到pgapzαa质粒中。在酵母中利用甘油醛三磷酸脱氢酶(gap)启动子组成型表达外源蛋白aggh。研究结果显示:筛选获得表达重组菌株,基因组pcr和western-blot验证正确;以葡萄糖为最优碳源培养下,表达量达到68mg/l;5l发酵罐中,发酵52h蛋白产量最高达238mg/l。蛋白经四步纯化后,获得纯度为95.8%的aggh融合蛋白。与利用醇氧化酶1(aox1)启动子表达的aggh比较,发现两者产量和活性没有明显差异。但是,gap启动子表达获得aggh融合蛋白更加方便,且发酵时间减少了27.8%(20h)。