一种简便快速的单引物pcr定点突变方法

为了解决在一些特殊位点上利用quickchange方法进行定点突变时会在突变位点处额外插入引物序列导致突变失败的问题,对quickchange法进行了改良。改良方法为:合成在突变位点处点突变的一对反向互补引物,分别进行单引物pcr扩增,将两种扩增产物混合,变性复性后加入dpni进行酶切,酶切产物转化大肠杆菌dh5α,抗性筛选阳性克隆进行测序验证。利用此法成功突变紫穗槐二烯合酶(amorpha-4,11-dienesynthase,ads)基因中多个利用常规方法突变均因引入额外引物而无法成功的特殊位点,证明此方法实践上可行,而且也可以避免插入额外引物序列,这也从侧面证明额外引物插入的原因是双引物同时反应。