菠菜sohb基因的原核表达及功能分析

为了进一步揭示菠菜非共生血红蛋白(sohb)的功能,通过rt-pcr的方法从菠菜根中克隆了sohb基因编码区全长序列,并将其克隆到原核表达载体pet32a上,构建原核表达载体pet32a-sohb,并转化大肠杆菌bl21star(de3)获得原核表达工程菌株。通过iptg法诱导该重组质粒在大肠杆菌中得到高效表达,融合蛋白分子质量约为38kda,且在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经ni2+nta亲和柱纯化,获得纯化的融合蛋白。与空载体相比,重组菌对硝化胁迫的抗性增加。以纯化的融合蛋白为抗原免疫昆明小鼠,制备多克隆抗体,并对其进行了westernblot检测。实验结果为进一步研究菠菜sohb基因功能奠定了基础。