hbvpre-c-fc融合蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其生物学活性研究

目的:在杆状病毒表达系统中表达融合蛋白乙型肝炎病毒前c蛋白-小鼠iggfc蛋白(hbvprecoreprotein-mouseiggfc,hbvpre-c-fc),并鉴定其免疫原性。方法:目的基因hbvpre-c-fc连接到pfastbac1载体,获得的pfastbac1-hbvpre-c-fc质粒转化dh10bac感受态,通过tn7转座子将目的基因转座到bacmid中,得到bacmid-hbvpre-c-fc穿梭载体,脂质体包被后转染sf9昆虫细胞获得p1代病毒,重复转染sf9获得高滴度病毒。收集细胞上清超滤后通过proteing亲和层析柱纯化得到目的蛋白hbvpre-c-fc。纯化的蛋白大腿内侧肌肉注射免疫balb/c小鼠并检测血清中乙型肝炎病毒核心蛋白抗体产生量。结果:hbvpre-c-fc在昆虫细胞中成功表达,纯化后蛋白纯度达90%以上,蛋白产量约为3.03mg/l,纯化蛋白能有效刺激balb/c小鼠产生特异抗体。结论:成功地在杆状病毒表达系统中表达了具有免疫原性的hbvpre-c-fc蛋白,为生产乙肝治疗性疫苗奠定了基础。