基因重组tnfα衍生物trsp10的高效制备及其对du145细胞抑制作用研究

利用基因工程技术表达能够促使肿瘤细胞du145凋亡的肿瘤坏死因子α(tnfα)的衍生物trsp10,并在体外研究其对du145细胞的抑制效应。以重叠延伸pcr方法合成trsp10基因序列,并插入高效表达的质粒载体pkyb-mcs的ndeⅰ和sapⅰ酶切位点之间,优化融合蛋白诱导表达的条件,建立了从载体构建到重组菌表达、制备的工艺技术条件。mtt法检测trsp10对前列腺癌细胞du145增殖的抑制作用。实验结果表明:重组菌er2566诱导表达可溶性融合蛋白的最佳条件是诱导剂iptg浓度为0.8mmol/l、诱导表达温度37℃、诱导表达时间8h。利用impact系统及hplc技术纯化制备trsp10,得到产物纯度达到96%,质谱鉴定确定其分子质量为3.59kda,与理论值相符;体外细胞学研究结果表明,trsp10对前列腺癌细胞du145有明显的抑制作用,在5,10,20,40μmol/ltrsp10及10μmol/ltnfα阳性对照处理后48h抑制率分别达到11.40%,22.97%,33.26%,48.35%及42.50%。