黑曲霉aspergillusniger963植酸酶基因phya2n-糖基化突变体的构建与表达分析

为研究n-糖基化对黑曲霉aspergillusniger963植酸酶蛋白酶学性质的影响，利用megaprimerpcr介导基因定点突变的技术，构建了植酸酶phya2基因两个n-糖基化突变体，即将该基因编码蛋白质n87位和n102位的天冬酰胺密码子置换为编码与其具有相似结构的谷氨酰胺密码子，两个突变体分别命名为n87q、n102q,经测序结果比对和图谱分析，表明在核酸水平上成功实现了点突变，构建了酵母表达载体ppic9-n87q，ppic9-n102q，转化毕赤酵母gs115，经发酵罐水平诱导表达后，获得了n-糖基化缺失突变蛋白，对突变体蛋白在60℃进行处理发现，突变体n87q处理1h后剩余50%的酶活，n102q处理10min后酶活完全丧失，在37℃，不同的ph缓冲体系（ph1～10）处理1h，n87q剩余约大于70%的活性，而n102q在ph＞8的环境下，没有检测到酶活。