猪fcγriii的原核表达及多克隆抗体的制备

目的：构建猪fcγriii基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备鼠抗猪fcγriii抗血清。方法：从质粒ptg19-t-fcγriii中用pcr方法克隆到编码完整猪fcγriii蛋白分子的基因片段，将其插入到原核表达载体pet-32a中，构建了猪fcγriii原核表达载体pet-fcγriii,转化大肠杆菌bl21(de3)，iptg诱导蛋白表达，经尿素洗涤纯化后，以纯化后的融合蛋白fcγriii-his为抗原免疫小鼠，获得抗血清。westernblotting、elisa法鉴定获得的抗血清，elisa结果显示抗体效价为1∶16000，具有高度特异性,免疫印迹结果显示制备的多抗可以与重组猪fcγriii蛋白特异性结合。结果：成功构建猪fcγriii原核表达载体，纯化到融合蛋白fcγriii-his，用纯化的融合蛋白免疫小鼠制备了多克隆抗体，westernblotting、elisa法证实多克隆抗体制备成功。结论：成功获得了猪fcγriii多克隆抗体，为进一步研究猪fcγriii蛋白的功能奠定了基础。