以seldi芯片进行细胞标本蛋白分析的方法学研究

目的：探讨以seldi芯片技术进行细胞标本蛋白分析的最适方法及条件，筛选细胞标本蛋白表达差异。方法：对细胞标本分别用超声裂解法，u9细胞裂解缓冲液配方和自配细胞裂解液提取蛋白，以bca法测定蛋白浓度；分别以磁珠活化后点样和生物芯片处理器点样使蛋白样品与芯片结合；并对提取蛋白进行检测，比较不同蛋白浓度梯度点样及wcx2，sax2，imaccu，h50芯片捕获蛋白差异，用wcx2芯片筛选蛋白差异表达。结果：相同培养条件细胞以上述三种不同蛋白提取方法获得的蛋白浓度分别为：0.25±0.034μg/μl，0.6±0.06μg/μl，1.02±0.077μg/μl；生物芯片处理器点样法操作简单，要求样本量较少，点样时间短；seldi芯片蛋白质峰图谱与蛋白浓度呈较好的正相关；wcx2,sax2,h50,imac-cu芯片捕获的蛋白质种类有较大区别；在分子量1000～300000da范围内，以wcx2芯片共检测到87个差异蛋白峰，其中17个呈趋势变化。结论：上述三种方法比较，选用自配的细胞裂解液提取蛋白的浓度较高且更适于芯片研究；生物芯片处理器能较好地使蛋白与芯片结合；seldi芯片能准确定位蛋白，且其蛋白质峰与被测蛋白浓度呈正相关变化；seldi各芯片捕获蛋白类型不同，选择适宜芯片或联合运用芯片检测更易获得较理想蛋白差异表达结果。