代谢型谷氨酸受体5亚型高通量筛选模型的建立

目的:利用荧光测钙的方法，建立了人源代谢型谷氨酸受体5亚型(mglur5)的高通量筛选模型。方法:通过基因合成得到mglur5的orf区域，并将其构建到pcnda3.1真核表达载体上。将此重组质粒转染hek293细胞，利用抗生素筛选和钙流检测方法得到稳定表达mglur5的重组细胞株。结果:对试验条件:接种密度,孵育时间,溶剂dmso浓度进行了优化，建立了稳定可靠的实验系统。并使用该受体特异激动剂和拮抗剂进行了功能验证,其中激动剂ec50l-quisqualicacid(67.8nmol/l)>l-glu(2.73μmol/l)，抑制剂ic50mtep(3.3nmol/l)>fenobam(23.5nmol/l)系统z因子为0.68,证明建立了一个人源mglur5抑制剂的细胞筛选模型。利用此重组细胞株对360种化合物进行了筛选，找到了若干对mglur5有抑制效果的化合物。结论:此细胞模型适用于mglur5抑制剂的高通量筛选。