鸡输卵管特异表达载体的构建及其体内表达

用高保真pcr法分别从中国狼山鸡基因组dna中扩增出卵清蛋白基因(ov)的5′和3′调控区,将其克隆入pgemt载体,经序列测定证明与已发表的ov基因相应区域无差异。将上述调控序列插入黏粒载体,构建成鸡输卵管特异表达载体pov。再将lacz报告基因克隆在上述载体5′调控区的下游,获得的重组载体命名为povlacz。用脂质体包裹的povlacz注射产蛋鸡,rtpcr检测结果表明lacz基因仅在注射鸡输卵管的膨大部表达,不能在肝、脾、肾、心等组织表达。在上述组织中,仅输卵管膨大部能检测出β半乳糖苷酶活性(1167muml),注射雌激素对报告基因的表达具有促进作用(1533muml),重组酶能被分泌到鸡蛋的蛋清中(1733muml)。结果表明,克隆的鸡ov基因调控区能有效驱动报告基因在输卵管的特异表达,构建的载体能用于鸡输卵管生物反应器的研制。