人分泌型磷脂酶a2(hspla2-iia)基因的克隆、表达及活性鉴定

目的为了构建人分泌型磷脂酶a2(secretaryphospholipasea2,spla2-iia)的有效表达系统，本文从胎脾中提取总rna，采用rt-pcr方法扩增出编码spla2-iia的基因定向地克隆于硫氧环蛋白基因融合表达载体pet32a的trxa基因3’末端，构建符合读码框的融合表达载体pet32a-spla2-iia。37℃下经iptg诱导，hspla2-iia融合蛋白在大肠杆菌bl21(de3)中获得高效表达，表达产物以包涵体的形式存在。包涵体经8m尿素溶解、复性后检测结果显示具有较高的催化活性并呈现剂量依赖关系。结论：以大肠杆菌为宿主，成功表达了hspla2-iia蛋白，为进一步进行hspla2-iia的大量生产和功能研究奠定了基础。