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中国生物工程杂志 2006
用两步ms-pcr结合elisa检测hiv-1逆转录酶基因的耐药性突变Abstract: 高效抗逆转录病毒治疗法(haart)的推广使用有效地抑制了hiv-1病毒的传播和艾滋病(aids)的发病率、死亡率。近年来,hiv-1逆转录酶基因突变所导致的耐药性成为了haart的治疗失败的主要原因,耐药性突变的检测对于指导病人用药以及新药开发具有重要意义。本工作发展了一种检测hiv-1逆转录酶基因耐药性突变的新方法。采用两步ms-pcr方法检测hiv-1b亚型野生型和耐药突变型逆转录酶基因突变,检测点包括m41l、k70r、k103n、y181c和t215,并在两步ms-pcr基础上,设计比野生型引物长的突变型引物,结合微孔板杂交elisa呈色技术检测各点突变。结果显示,简化的两步ms-pcr能保持灵敏度和特异性高的优点,elisa的阳性结果与阴性结果的比值(p/n)达到要求,两步ms-pcr结合elisa方法灵敏度高,操作简单、结果直观、成本低、相对耗时短且能进行高通量检测,其无论在hiv-1耐药性突变及其它的点突变检测中具有较好的临床应用前景。
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