丙酮酸甲酸裂解酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及酶学性质的研究

丙酮酸甲酸裂解酶（pyruvateformat-lyas，pfl）是厌养或兼性厌养微生物中，代谢途径的关键酶之一，为了进一步研究其功能，我们以大肠杆菌jm109菌株基因组dna为模板，进行pcr扩增大肠杆菌中的pfl基因，为测序方便将所得dna片段连接到pmd18-t载体上，将测序正确后的pfl基因连接到表达载体pet-22b(＋)中，重组表达载体在大肠杆菌bl21(de3)中诱导表达,通过sds-page电泳分析，在分子量为85kda处出现新生的蛋白条带。利用金属亲和层析对添加了6×组氨酸标签的pfl进行纯化，对pfl的酶学性质进行了研究。结果表明：此酶的最适温度为35℃，最适ph为7.5，米氏常数km＝2.3mmol，tm＝49.9℃。