e.colit蛋白cm的原核表达及核磁方法指导下的晶体优化

越来越多的研究表明许多致病菌的病原性与生物体内莽草酸途径中的分支酸变位酶(chorismatemutase,cm)有着密切的关系,因此cm成为了开发新型抗生素和抗菌药物的热门靶标酶。采用分子克隆的方法,在感受态细胞bl21-gold(de3)中重组表达大肠杆菌(e.coli)t蛋白的cm(cmt)。通过ni-nta亲和层析柱、gesuperdex75凝胶过滤层析柱和gemonoq阳离子交换层析柱纯化后得到电泳纯的重组蛋白,质谱鉴定结果与原始序列基本吻合。经过蛋白质晶体试剂盒的初步筛选,在30%peg4000,100mmol/lnaacph4.6,200mmol/lnh4ac条件中发现cmt晶体。利用核磁共振方法,分析cmt的1h-15nhsqc谱图信息,指导设计cmt晶体的优化方案,成功获得高衍射能力的cmt晶体,为cmt结构的解析奠定了坚实的基础。