酶联合消化法和贴块法分离小鼠肺动脉平滑肌细胞及其生物学特性的研究

目的:探讨适用于小鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonaryarterialsmoothmusclecells,pasmcs)分离培养及鉴定的技术方法。方法:采用ⅰ型胶原酶、木瓜蛋白酶联合消化法及组织贴块2种方法对pasmcs进行体外培养。在倒置显微镜下观察pasmcs的生长特点;台盼蓝法测定细胞传代成活率;分别对pasmcs行生长曲线、mtt法、dna周期检测比较增殖情况;免疫荧光染色法鉴定细胞。结果:酶消化法分离培养的细胞1d后,在倒置相差显微镜下可见细胞贴壁呈椭圆形生长,4d后生长迅速呈典型的谷-峰状生长,7d后达80%融合即可传代;贴块法培养的细胞3d后,可见细胞从组织块边缘长出,7d后细胞数量逐渐增多,10d后细胞生长迅速呈单层致密排列,细胞传代成活率均为96%。2种方法获得的第2代pasmcs经平滑肌ɑ-肌动蛋白(ɑ-smactin)免疫荧光染色鉴定,其阳性率均为90%以上;生长曲线、mtt法显示细胞增殖及细胞dna周期无明显差异。结论:2种方法均可高效获得pasmcs在体外稳定培养,为研究肺血管疾病提供较为理想的种子细胞。