基于t7启动子表达系统的呼吸道合胞病毒微型基因组的拯救

目的:以t7启动子表达系统为基础,通过rna病毒反向遗传学操作,拯救人呼吸道合胞病毒(humanrespiratorysyncytialvirus,rsv)微型基因组。方法:构建可分别表达rsv四种核壳体蛋白的辅助质粒px8δt-pt1-n,px8δt-pt1-p,px8δt-pt1-m2-1和px8δt-pt1-l以及含增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorecentprotein,egfp)开放读码框(openreadingframe,orf),rsv病毒前导序列(leaderregion/genomicpromotor),转录起始信号(genestart,gs)、转录终止信号(geneend,ge)和尾随序列(trailerregion/antigenomicpromoter)等顺式作用元件(cis-actingelements)的微型基因组重组质粒psc11-e,在上述的5个质粒中,均引入t7rna多聚酶(t7rnapolymerase,t7rnp)启动子,经鉴定正确后,先以psc11-e转染rsv感染的可组成型表达t7多聚酶的bsrt7/5细胞进行拯救,确定微型基因组编码质粒设计的合理性,而后通过5个质粒共转染bsrt7/5细胞,并通过荧光显微镜观察荧光的表达情况判断拯救成功与否。结果:成功构建了基于t7启动子表达系统的rsv微型基因组5质粒拯救系统,并实现了拯救。结论:该系统的成功构建,有助于今后对rsv病毒开展基因修饰研究。