麦芽四糖淀粉酶基因优化表达及酶学性质分析

麦芽四糖淀粉酶是一种新型外切淀粉酶,从淀粉的非还原末端特异地顺序切割第4个α-1,4糖苷键,产物为麦芽四糖,广泛应用于食品、医疗保健等领域。对来自嗜糖假单胞菌(pseudomonassaccharophila)的麦芽四糖淀粉酶基因序列进行优化,优化前后基因序列同源性达75%。将优化合成的成熟肽基因克隆至原核表达载体pet32a(+)上,转化大肠杆菌bl21(de3),经iptg诱导,重组蛋白主要以包涵体形式存在。包涵体经变性、复性、多步纯化,获得有活性的麦芽四糖淀粉酶。将麦芽四糖淀粉酶与不同来源的淀粉水解反应,结果表明,该酶能与7种不同来源的淀粉反应产生单一的麦芽四糖。经sds-page电泳,dns法和硅胶板薄层色谱分析法(tlc)进行酶学性质分析,结果表明麦芽四糖淀粉酶的分子量约为57kda,纯化后的酶液最适反应温度为45℃,最适反应ph为8.0。研究结果为麦芽四糖淀粉酶的研究和开发提供依据和参考。