抗肠炎沙门氏菌单链抗体制备及其特异性分析

目的:利用基因工程技术制备抗肠炎沙门氏菌的单链抗体。方法:从抗肠炎沙门氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞中纯化rna,反转录后扩增出抗体的重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)基因片段,采用重叠延伸的方法,用柔性多肽linker接头(gly4ser)3按vl-linker-vh方式将vh基因和vl基因拼接成单链抗体基因片段后,连接到pgex-4t-1载体上,进行重组转化。挑取阳性克隆,经iptg诱导后,通过gst柱进行亲和层析,最后利用elisa检测抗体的活性。结果:成功构建了表达抗肠炎沙门氏菌单链抗体的基因工程菌株,经sds-page和elisa检测结果表明,诱导表达的单链抗体scfv分子量约为60kda,其能特异与肠炎沙门氏菌结合,但与副甲伤寒沙门氏菌、鸭沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌有轻度交叉反应。结论:成功构建了抗肠炎沙门氏菌单链抗体的表达菌株,表达的单链抗体scfv可作为沙门氏菌的检测的候选抗体分子。