在结肠癌细胞中rna干扰tgfbr2慢病毒载体的构建及其功能的初步研究

目的:构建tgfbr2基因的rna干扰慢病毒载体,为研究该基因在结肠癌细胞中的作用奠定基础。方法:合成tgfbr2基因特异性rnai靶序列,与pcdnatm6.2-gw/emgfp-mir载体连接,构建干扰载体并鉴定。与tgfbr2质粒共转染hek293细胞,qrt-pcr和westernblot方法筛选最佳干扰序列,感染sw480细胞。10ng/mltgf-β1和20ng/mltnf-a共作用tgfbr2干扰后的sw480细胞和未干扰组细胞72h后,通过细胞侵袭试验计算细胞侵袭数目。结果:成功构建tgfbr2的rna干扰载体,第4组序列效果最佳,感染sw480后,tgfbr2基因的mrna表达抑制率为78.45%。tnf-a和tgf-β1处理干扰前后的sw480细胞,通过细胞侵袭试验显示各组细胞迁移的数目:干扰组为89.3±7.9,未干扰组为15.1±8.2,干扰组细胞明显多于对照组(p<0.01)。结论:成功构建人tgfbr2基因特异性的慢病毒干扰载体,并建立稳定的细胞株,为预防和干预结肠癌的早期转移奠定基础。初步提示在tgf-β1和tnf-a因子存在的炎症微环境中,tgfbr2基因突变的结肠癌细胞更具有侵袭性。