反义锁核酸阻断耐甲氧西林金黄色葡萄球菌agr群体感应系统

目的:利用反义策略,设计、筛选针对agramrna的反义锁核酸,阻断agr群体感应系统,降低mrsa毒力因子的表达,减小细菌生存压力,为抗耐药菌感染提供一种新策略。方法:应用primerpremier5.0和rnastructure4.5两种软件,设计、筛选2条针对agramrna的反义寡核苷酸序列,对其进行锁核酸修饰,并与透膜肽(kff)3k共价连接,将这两条反义序列导入细菌体内。体外与mrsa共培养,观察细菌生存情况。实时定量pcr检测其对agra及agr群体感受系统的效应分子rnaⅲ和下游毒力基因hla的转录水平的影响,westernblot检测其是否能抑制α-溶血素的表达。结果:两条反义锁核酸序列plna34和plna522在体外均无抗菌活性,但都能不同程度的抑制agra,rnaⅲ和hla的转录水平;相比较而言,plna34的抑制效果更佳,并能明显抑制α-溶血素的分泌表达。结论:agra可作为抗mrsa感染的新靶点,为新型抗mrsa药物的研发提供了理论基础。