重组人lif融合蛋白表达纯化及其活性鉴定

目的:原核表达重组hlif融合蛋白并进行诱导表达、纯化及活性鉴定。方法:将hlif基因克隆至pthiohisa载体,构建融合表达载体pthiohisa-hlif,转化大肠杆菌bl21(de3),iptg诱导表达。表达产物经亲和层析后,westernblot检测目的蛋白的特异性。用小鼠胚胎干细胞脱饲养层培养对纯化后的重组hlif融合蛋白进行生物活性的鉴定。结果:降低诱导温度和延长诱导时间能增加hlif融合蛋白的可溶性表达,纯化后的重组蛋白纯度大于95%,westernblot检测显示了良好的特异性。在脱饲养层细胞培养条件下,添加纯化的hlif融合蛋白能够有效的维持小鼠胚胎干细胞的未分化状态。结论:重组hlif融合蛋白可在大肠杆菌中高效表达,具有良好的特异性,为干细胞研究及hlif蛋白的其他功能研究奠定了基础。