一种原位示踪外源目的基因表达载体的构建

应用分子克隆技术,分别将增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,egfp)、内部核糖体进入位点(internalribosomeentrysite,ires)和编码h-ras基因c端20个氨基酸的dna(rasc20)片段插入真核表达载体pcdna3,构建真核重组表达载体并将其命名为pzx。通过脂质体介导将该载体转染人宫颈癌细胞系hela,培养过夜后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞内的分布,并与pegfp-c3质粒dna转染该细胞系进行比较。结果表明,转染pzx载体的实验组细胞膜发出绿色荧光,而对照组绿色荧光则均匀弥散于整个细胞中,工具性载体pzx已构建成功