诱导人参发根的rolc基因植物表达载体构建及其在人参中的表达

根据slightom等ria4tl-dna序列分析结果,设计了一对引物,以ri质粒dna为模板,利用pcr方法对rolc基因进行了扩增。利用pgem-t载体对rolc基因进行了克隆和测序。结果,克隆的dna片段序列与报道的orf12阅读框内的rolc序列一致。将pgem-t-rolc用限制性内切酶saci酶切,与经smai酶切ciap去磷酸化的puc19质粒重组,经蓝白斑筛选得到正向重组的puc19-rolc。再用xbal-saci双酶切puc19-rolc与pbi121,将rolc基因定向克隆到具有camv35s启动子的pbi121表达质粒上,构建成植物表达载体pbi-rolc。用pbi-rolc转化农杆菌lba4404构建成的lba4404(pbi-rolc)工程菌转化人参子叶,获得发根的表达。经pcr扩增分子检测,证明rolc基因确已整合到人参发根基因组中。经对转化的人参发根中单体皂苷含量测定,发现发根中含有所检测的7种人参单体皂苷,总皂苷含量达18.55mg/g。