大连蛇岛蝮蛇类凝血酶在大肠杆菌中的表达与纯化

将编码大连蛇岛蝮蛇类凝血酶(gloshedobin)的基因克隆于表达载体pet-32a(+)中,以融合蛋白形式在大肠杆菌中获得表达。在25℃下经1mmol/liptg诱导6h,sds-page和蛋白质印迹分析表明,部分融合蛋白以可溶形式存在于大肠杆菌的细胞质中。针对金属螯合亲和层析分离某些含his-标签重组蛋白质时专一性不高,并且存在配基泄漏的缺陷,设计合成了以抗重组类凝血酶的鸡卵黄免疫球蛋白为配基的免疫亲和层析柱。通过疏水色谱octylsepharoseff,igy免疫亲和层析以及强阴离子交换色谱sourceq等三步柱色谱分离纯化获得比活力为454.7u/mg的重组蛇毒类凝血酶,活力回收率为34.8%。蛋白质印迹分析和纤维蛋白原凝结活性分析表明,该表达产物具有相应的免疫活性和酶活性