苦荞过敏蛋白tb22的原核表达及纯化

为了确定苦荞主要过敏原蛋白tb22的抗原决定簇,揭示其致敏机制,为以后的分子改造及育种改良打下基础,需要在体外微生物体系中获得大量的纯化蛋白。以pqe31为表达载体,m15为表达菌株,使用iptg诱导,在37℃获得了以包涵体形式存在的表达产物。经westernblotting检测,证明表达条带n端带有histidinetag。使用8moll尿素初步纯化后,目的蛋白含量达到40%以上。进一步hitrapchelatinghp亲和纯化,表达蛋白的纯度达到90%以上。建立了适合重组tb22纯化的基本方法,得到了纯化的包涵体,为抗tb22抗体的制备及其抗原决定簇的研究奠定了基础。