小鼠金属硫蛋白──i　cdna在蓝藻中的克隆和表达

生物工程技术在工业、农业和环境保护上的应用日益广泛，将工程微生物应用于环境污染的治理，是一条快速、安全又经济的途径。本文报道了获得一种清除重金属污染工程藻的研究。将小鼠金属硫蛋白－ｉ（ｍｏｕｓｅｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ－ｉ，ｍｍｔ－ｉ）ｃｄｎａ基因片段插入到质粒ｐｒｌ４３９上的强启动子ｐｐｓｂａ之后，并与穿梭载体ｐｄｃ－８相连构建成功大肠杆菌──蓝藻穿梭表达载体ｐｄｃ－ｍｔ，然后通过三亲结合转移法将ｐｄｃ－ｍｔ转入固氮丝状体蓝藻鱼腥藻（ａｎａｂａｅｎａ）７１２０中，经新霉素筛选获遗传稳定的转外源ｄｎａ藻株；纯化单藻落扩大培养后，提取蓝藻质粒，斑点杂交确定ｍｍｔ－ｉｃｄｎａ的转人；在培养基中加入重金属ｃｄ，培养后收集藻细胞，用ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ，极谱法和原子吸收等多种方法确定金属硫蛋白的表达，并计算表达量约为４０μｇｍｔ／ｇ藻鲜重。