唾液酸化路易斯-x合成关键酶基因的克隆表达

唾液酸化路易斯-x(sialyllewisx,slex)是选择素家族的一个共同糖配体,通过与选择素竞争性地结合炎性细胞,可以抑制炎症反应。通过克隆表达slex合成过程中的关键酶,在体外进行slex的生物合成,用于相关乳腺炎防治药物的研发。β-1,4-半乳糖基转移酶(β-1,4-galactosyltransferase,gt)就是参与slex生物合成过程的关键酶之一。利用相关软件对牛的gt基因进行了生物信息学的分析,了解了gt的相关理化性质。通过人工合成的方法获得了gt基因的cds,构建了重组质粒pmd18-gt,并亚克隆至表达载体ppic9k。通过电转化将线性化的表达质粒ppic9k-gt整合到宿主菌p.pastorisgs115基因组上,构建了重组酵母gs115-gt。经诱导表达后,sds-page检测到了目的蛋白条带,证明了此基因在p.pastorisgs115中能够可溶性表达;并用苯酚红法测定了粗酶液的活性,其比酶活为16.4u/ml,这为其进一步研究奠定了基础。