pink1与α-synuclein相互作用结构域鉴定

目的:确定pink1与α-synuclein相互作用的结构域。方法:将pink1不同结构域质粒(pcdna3.1-3xflag-hpink1wt,pcdna3.1-3xflag-hpink1(g309d),pcdna3.1-3xflag-hpink1(δn35),pcdna3.1-3xflag-hpink1(δc145),pcdna3.1-3xflag-hpink1(156~509),pcdna3.1-3xflag-hpink1(δ156~581),pcdna3.1-3xflag-vector)分别和pcmv-myc-α-synuclein质粒共转染人胚肾hek293t细胞,通过免疫共沉淀(co-ip)技术验证pink1与α-synuclein相互作用的结构域;同时进行免疫细胞化学染色,利用激光扫描共聚焦显微镜观察两种蛋白的共定位关系。结果:co-ip实验结果表明pink1与α-synuclein相互作用的结构域为pink1的激酶结构域。免疫细胞化学实验也证实α-synuclein只与含激酶结构域的pink1蛋白在细胞中存在共定位关系。结论:pink1与α-synuclein相互作用的结构域位于其激酶结构域。