带有穿膜肽重组ptd-klf4的制备及活性鉴定

klf4是kruppel样转录因子(kruppel-likefactors,klf)家族中的一员,是维持胚胎干细胞(embryonicstemcells,escs)全能性的重要转录因子。蛋白质转导结构域(proteintransductiondomain,ptd)能够携带大分子进入细胞。为了获得具有穿膜功能的重组klf4蛋白,利用原核表达载体pkyb表达klf4与ptd的融合蛋白ptd-klf4,用ni柱纯化融合蛋白并作westernblotting鉴定。利用异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,fitc)标记ptd-klf4检测其穿越中国仓鼠卵巢(chinesehamsterovary,cho)细胞细胞膜的能力;用荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer,fret)检测重组融合蛋白ptd-klf4结合目的dna的活性。结果表明:重组ptd-klf4可以成功进入细胞、定位细胞核内,穿膜效率为(22.29±2.1)%。重组融合蛋白ptd-klf4引起细胞形态变化,并具有与目标dna序列特异结合的能力。重组ptd-klf4的制备为外源蛋白诱导多能干细胞(inducedpluripotentstemcells,ipscs)奠定基础。