转豇豆胰蛋白酶cpti基因棉花检测用标准分子的制备

利用pcr的方法克隆豇豆胰蛋白酶基因cpti、基因表达调控元件35s启动子、nos终止子以及棉花内标基因sad1,连接到克隆载体上,构建成质粒标准分子pgb。pcr检测过程中,质粒标准分子和转基因棉花中能扩增出4个目的条带,而非转基因棉花中不能扩增出相应的条带,证明构建好的质粒标准分子能用于转基因棉花的定性检测。荧光定量pcr绘制4个目的基因片段的标准曲线,各标准曲线的相关系数均达到0.985以上,说明建立的pcr具有很好的ct值-初始浓度相关性,达到定量分析的需求,而且荧光定量pcr反应具有很好的重复性和稳定性,可用于实际样品的定量检测。