胰蛋白酶抑制剂ksti3基因新型真核表达载体的构建及其在盐藻中的表达

应用pcr技术扩增nos基因、camv35s启动子片段和氯霉素抗性基因cat,并与胰蛋白酶抑制剂ksti3基因连接,构建真核表达载体pmdckn-cat。dna序列分析结果表明:表达载体中的胰蛋白酶抑制剂ksti3基因、启动子camv35s、终止子nos和氯霉素抗性基因cat与已知序列完全一致。采用liac/peg介导法将质粒pmdckn-cat转化至盐藻细胞中,通过氯霉素抗性基因筛选和pcr鉴定获得转基因盐藻细胞。经westernblotting检测,在硝酸纤维素膜上出现清晰的条带,分子量为20.1kda,证明胰蛋白酶抑制剂ksti3基因在盐藻中得到成功表达。