硒蛋白sep15基因克隆、定点突变及其原核表达

克隆鉴定猪硒蛋白sep15基因(sep15),将其突变实现原核表达,为以猪为模型研究sep15功能奠定基础。实验以rt-pcr从猪脾总rna扩增出含开放阅读框(orf)至poly(a)共1230bp的sep15cdna,3'-非翻译区sec插入元件为2型,489bp的orf及对应氨基酸序列与人相应序列的相似度分别为85.1%和92.7%,orf含一个硒代半胱氨酸(sec)密码子tga,定点突变为半胱氨酸(cys)的tgc后,经载体pet30转入大肠杆菌bl21(de3),0.4mmol/liptg诱导表达3h获得融合表达产物;该产物在westernblot检测中与人sep15sec下游肽段的商品化多抗产生特异性免疫印迹。猪sep15被首次成功克隆并鉴定,其cys突变体的原核表达产物与人sep15c-端抗体存在交叉免疫反应。