野生罂粟cor、bbe基因片段融合及其rnai载体构建

可待因酮还原酶(cor)与小檗碱桥酶(bbe)是吗啡合成代谢途径的关键酶，其活性大小直接影响着吗啡合成途径中生物碱的代谢合成。采用rt-pcr从罂粟幼叶克隆出cor和bbe基因全序列，同源性比较结果显示，它们与genbank上已报道的cor和bbe基因高度同源。利用blast及分子生物学软件dnastar对cor和bbe基因的cdna序列同源性进行分析比较，分别从各基因中筛选和克隆了一段同源性极低、约400～500bp的片段；并应用重叠pcr法将其拼接成744bp的融合基因bc，以中间载体phannibal和植物表达载体part27为基础，构建了以camv35s启动子驱动的含有“正向bc融合片段-pdk内含子-反向bc融合片段”的ihrnai植物表达载体，通过转化野生罂粟，初步研究了以cor和bbe基因为靶标的rnai对内源吗啡合成的抑制效果，为进一步培育低吗啡高蒂巴因的罂粟种质提供了依据。